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点击下载该文件 日期:2016/1/13 13:45:35
单宁含量试剂盒说明书
微量法 100管/96样
测定意义:
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多
种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;
具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
测定原理:
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm处有最大吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 4mL× 1瓶,4℃保存;
试剂二:液体 3mL × 1瓶,4℃保存;
单宁的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL
蒸馏水),充分匀浆后转移到 EP管中,80℃水浴提取 30min, 8000 g,常温离心 10 min,
取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上,调节波长至 760nm处,蒸馏水调零;试剂一和试
剂二 37℃预热 10min以上;
2、操作表:
试剂名称(µL)
样本
对照管
测定管
5
蒸馏水
135
130
35
试剂一
35
混匀,室温静置 5min
试剂二
30
30
混匀,室温静置 30min,760nm处读取吸光值 A,ΔA=A测定-A对照,对照管只要做一管。
单宁含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0132x - 0.0035;x为标准品浓度(µg/mL),y为吸光
值。
2、按样本鲜重计算:
单宁含量(µg /g鲜重)= [(ΔA+0.0035) ÷0.0132×V1]÷(W×V1÷V2)=75.76×(ΔA+0.0035)
÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA+0.0035) ÷0.0132×V1]÷(V1×Cpr)=75.76×(ΔA+0.0035) ÷Cpr。
V1:加入样本体积,0.005mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本鲜重,g。
b.用 96孔板测定的计算公式如下:
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0066x - 0.0035;x为标准品浓度(µg/mL),y为吸光
值。
2、按样本鲜重计算:
单宁含量 (µg/g鲜重)=[(ΔA+0.0035)÷0.0066×V1]÷(W×V1÷V2)=151.52×(ΔA+0.0035)
÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA+0.0035)÷0.0066×V1]÷(V1×Cpr)=151.52×(ΔA+0.0035)÷Cpr。
V1:加入样本体积,0.005mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本鲜重,g。