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新建文件夹单宁含量试剂盒说明书(微量法)

点击下载该文件    日期:2016/1/13 13:45:35

 

单宁含量试剂盒说明书 

                                 微量法  100/96

测定意义: 

单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多

种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;

具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。

测定原理:

单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm处有最大吸收峰。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制: 

试剂一:液体 4mL× 1瓶,4保存;

试剂二:液体 3mL × 1瓶,4保存;

单宁的提取:  

按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 15~10的比例(建议称取约  0.1g组织,加入   1mL

蒸馏水),充分匀浆后转移到 EP管中,80水浴提取  30min,  8000  g,常温离心 10 min

取上清液待测。

测定步骤: 

1、分光光度计或酶标仪预热 30min以上,调节波长至  760nm处,蒸馏水调零;试剂一和试

剂二 37预热 10min以上;

2、操作表:

试剂名称(µL

样本

对照管

测定管

5

蒸馏水

135

130

35

试剂一

35

混匀,室温静置  5min

试剂二

30

30

混匀,室温静置 30min760nm处读取吸光值  AΔA=A测定-A对照,对照管只要做一管。

 


 

单宁含量计算: 

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归方程为 y =  0.0132x -  0.0035x为标准品浓度(µg/mL)y为吸光

值。

2、按样本鲜重计算:

单宁含量(µg /g鲜重)=  [(ΔA0.0035) ÷0.0132×V1]÷W×V1÷V2=75.76×(ΔA0.0035)

÷W

3、按样本蛋白浓度计算:

单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA0.0035) ÷0.0132×V1]÷(V1×Cpr)=75.76×(ΔA0.0035) ÷Cpr

V1:加入样本体积,0.005mLV2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL

W:样本鲜重,g

b.用 96孔板测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0066x - 0.0035x为标准品浓度(µg/mL),y为吸光

值。

2、按样本鲜重计算:

单宁含量  (µg/g鲜重)=[(ΔA0.0035)÷0.0066×V1]÷(W×V1÷V2)=151.52×(ΔA0.0035)

÷W

3、按样本蛋白浓度计算:

单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA0.0035)÷0.0066×V1]÷(V1×Cpr)=151.52×(ΔA0.0035)÷Cpr

V1:加入样本体积,0.005mLV2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL

W:样本鲜重,g

 

  

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