(一)组织细胞样本的常规操作
1、制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞
悬液，离心弃上清。
2、裂解: 加入3～5倍细胞沉淀体积的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～
2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
3、离心: 4℃，400～500g离心5min，弃红色上清。如无低温离心机，本步骤亦可在室温
下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2 和步骤3各一次。
5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬
沉淀。4℃，400～500g离心2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入
的 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。
6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)
1、制备细胞悬液：新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞
悬液，离心弃上清。
2、裂解：加入细胞5倍细胞沉淀体积的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～
2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
3、加入15～20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。
4、离心：4℃，400～500g离心5min，弃红色上清，本离心步骤亦可在室温下操作。
5、如果发现红细胞裂解丌完全，可以重复上述步骤2～4各一次。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
(三)血液样本的常规操作
1、取新鲜抗凝血，400～500g离心5min，弃上清。
2、裂解: 加入6～10倍细胞沉淀体积的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1～
5min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。(特别提醒：对于鼠的血液，
裂解1～2min 已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4～5min，并且裂解过程中
轻轻摇动以促进红细胞裂解。)
3、离心: 4℃，400～500g离心5min，弃红色上清。如无低温离心机，本步骤亦可在室温
下操作。
4、如果发现红细胞裂解丌完全，可以重复上述步骤2 和步骤3 一次。
5、洗涤: 根据实验要求加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉
淀。4℃，400～500g离心2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的
PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
注意：对于微量或少量的血液样本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液体积
的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 进行第 2 步操作，并在 4℃或室温裂解 4～15min。对于鼠的血
液，裂解4～5min 已经足够；对于人的外周血，宜延长裂解时间至10min，但通常不宜
超过15min，并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。
四)血液样本的快速操作(无需洗涤)
1、新鲜抗凝血中加入10倍体积的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，轻轻吹打混匀，裂解4～15min。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。（特别提醒：对于鼠的血液，裂解
4～5min 已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至 10min，但通常不宜超过15min，
并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。）
2、加入20～30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。
3、400～500g离心5min，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2 和步骤3 一次。
5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
Tris-氯化铵红细胞裂解液操作注意事项：
1、制备细胞悬液时应根据实验需要，不一定要制备成单细胞悬液。
2、后续试验如果是用于细胞培养，操作过程中应注意无菌操作，尽量在超净工作台内操作。
3、离心步骤尽量在 4℃离心机上操作。
4、常规步骤不快速步骤的区别在于：常规步骤多了一步洗涤过程的离心，可以节省洗涤液
的用量，并且洗涤效果也更好，丌需要大体积的离心管；快速步骤少了一次离心过程，洗涤
效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
5、离心洗涤后，通常极微量的红细胞丌会影响后续的检测。
6、如果经过 ACK Lysis Buffer 处理后的样品后续用于总RNA的提取，在处理细胞时丌必
使用 DEPC处理的溶液，即无需在该操作中特意去除RNase。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
技术支持:阿仪网
