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植物脱氢酶(Plant dehydrogenase, pDHA) 试剂盒说明书

点击下载该文件    日期:2019/10/30 16:35:57

植物脱氢酶试剂盒测定意义
生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。
植物脱氢酶试剂盒测定原理
受氢体 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即 TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone,即 TF)呈现红色,在波长 485nm 处有最大吸收峰,测定其 485nm 吸光值,即得植物脱氢酶活性。
需自备实验仪器及用品
恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、研钵、滤纸、可见分光光度计、1mL 比色皿、冰、蒸馏水和乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。
植物脱氢酶试剂盒试剂的组成和配制
试剂一:粉剂×2瓶,使用前加少量水溶解,定容至60mL,避光、4℃保存(尽量现配现用)。
试剂二:液体 60mL×6,4℃保存。
试剂三:乙酸乙酯,自备。
植物脱氢酶试剂盒样品处理
称取 0.5-1g 的植物组织,用双蒸水清洗 3-4 次,用滤纸吸干水分,备用。
酶活单位定义:在 37℃时,每小时每克样品使反应体系 OD 值每增加 0.01 为一个酶活单位。
计算公式:脱氢酶活性(U/g·h)=(OD485测定-OD485对照)÷0.01 ÷样品质量(g) ÷反应时间(h)
植物脱氢酶试剂盒注意事项
1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。
2. 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。
3. 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。
4. 如果测定出来的吸光值较大,需把样品适当稀释再进行测定。
5. 试剂盒 2-8℃保存。

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