蛋白质羰基含量检测试剂盒说明书

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容:

提取液：液体25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂0.1g×3 支，4℃保存。（使用前根据样品数，每支加1mL水溶解，每支为10 个样品用量）

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。（自备）

试剂六：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

产品说明：

蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:

天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿、蒸馏水， 无水乙醇和乙酸乙酯。

操作步骤：

一、样品处理

组织样品：称取约0.1g 组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于4℃，5000rpm 离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，然后取20μL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。

三、计算公式
1、按蛋白浓度计算：
蛋白质羰基含量（μmol/mg prot）=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V样品)
                               =（OD_370测定管－OD_370空白管）÷4.4÷Cpr；
2、按样本鲜重计算：
蛋白质羰基含量（μmol/g鲜重）=（OD_370测定管－OD_370空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V样品÷V提取)
                             =（OD_370测定管－OD_370空白管）÷4÷W
ε：蛋白质羰基消光系数，22mL•μmol^-1•cm^-1；d：比色皿光径，1cm；V：加入试剂六体积，1mL；V样品：加入样本体积，0.2mL；V提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g。
注意事项：
1.试剂一使用之前根据要测定的样品数现配，配置好后4℃保存，若变为黑色，则不能使用。
2.试剂二见光易分解，反应需严格避光。