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点击次数:1844 日期:2018/11/7 16:11:02
土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-PPO 主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放,催化土壤中芳香族
化合物氧化成醌,醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素,
完成土壤芳香族化合物循环,用于土壤环境修复。
测定原理:
S-PPO 能够催化邻苯三酚产生有色物质,后者在430nm 有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、乙醚100mL(不
允许快递)、蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂一:粉剂×2 瓶,4℃保存;临用前取一瓶加入15mL 蒸馏水,用不完的试剂4℃保存一周;
试剂二:液体12mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:乙醚50mL×2 瓶,4℃保存;(自备)
样品处理
新鲜土样自然风干或37 度烘箱风干,过30~50 目筛。
测定步骤
试剂名称 测定管
风干土样(g) 0.05
试剂一(μL) 500
振荡混匀,30℃恒温培养1 h
试剂二(μL) 200
试剂三(μL) 1750
振荡数次,室温静置30min,用蒸馏水调零,取1mL 上层液于430nm 处测定吸光值A。
(注意:1、因乙醚粘度小,易掉液,吸取前需先将枪头在上层液里润洗 2~3 次,再转移测
定;2、乙醚易挥发,转移到 96 孔板后立即测定,最好一个一个测定)。
S-PPO 活力计算
标准条件下测定的回归方程为y = 8.97x -0.003;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值A。
单位的定义:每天每g 土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-PPO 活力(mg/d /g 土样)=(A+0.003) ÷8.97×V 反总÷W÷T=131×(A+0.003)
T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积2.45mL;W:样本质量,0.05g。
原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司