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超氧阴离子(OFR)含量检测试剂盒

点击次数:4323 日期:2021/6/21 14:46:46

超氧阴离子(OFR)含量检测试剂盒
货号:H0142

规格:50T/48S

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

产品内容:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体32mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体25mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体25mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:氯仿,自备。    

亚硝酸钠标准品:液体1mL×1支,4℃保存。10μmol/mL亚硝酸钠。

产品说明:

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm有特征吸收峰,根据A530值可以计算样品中O2-含量。

自备实验用品及仪器:天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。

操作步骤

一、超氧阴离子提取

1.植物、动物组织:称取约0.1g样本,加入提取液1mL,充分研磨,12000rpm,4℃,离心20min,取20μL上清测定蛋白含量,其余上清作为待测样本。

2.血清或培养液:直接测定

二、测定操作表

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。

2、标准溶液的制备

称取适量亚硝酸钠标准液,首先16倍稀释至 0.625µmol/mL,然后进行倍比稀释至 0.3125、0.15625、 0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.0049、0.00244、0.0012、0.0006µmol/mL 梯度稀释的标准溶液, 用0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.00244、0.0006µmol/mL 标准管做标准曲线。

3、操作表

 

空白管

测定管

标准管

标准溶液(mL)

 

 

0.2

样本(mL)

 

0.2

 

提取液(mL)

0.5

0.3

0.3

试剂一(mL)

0.4

0.4

0.4

混匀,37℃水浴20min

试剂二(mL)

0.3

0.3

0.3

试剂三(mL)

0.3

0.3

0.3

混匀,37℃水浴 20min

试剂四(mL)

0.5

0.5

0.5

混匀,8000rpm,25℃,离心 5min,小心吸取上层水相 1mL,蒸馏水调零,

1mL 玻璃比色皿,测定 A530。计算∆A 标准=A 标准管-A 空白管,∆A 样品=A 测定管-A 空白管。每次实验空白管仅需做一管。

三、超氧阴离子含量计算公式

1.标准曲线的绘制

∆A 标准为 y 轴,标准溶液浓度为 x 轴,绘制标准曲线 y=kx+b

2.超氧阴离子含量的计算

∆A 样品带入方程得到 x 值(µmol/mL)

(1) 按照样本鲜重计算

超氧阴离子含量(µmol/g鲜重)= 2x×V 样本÷(V 样本÷V 提取×W)=2x÷W。

超氧阴离子产生速率(µmol/ min/g鲜重)= 2x×V 样本÷(V 样本÷V 提取×W)÷T=0.1x÷W。

(2) 按照蛋白质浓度计算

超氧阴离子含量(µmol/min/mg prot)= 2x×V 样本÷(V样本×Cpr)=2x÷Cpr。

超氧阴离子产生速率(µmol/min/mg prot)= 2x×V样本÷(V 样本×Cpr)÷T=0.1x÷Cpr。

(3) 按照血清或培养液体积计算

超氧阴离子含量(µmol/mL)= 2x

超氧阴离子产生速率(µmol/min/mL)= 2x÷T=0.1x。

V 样本:参与反应样本体积,0.2mL;V提取:提取过程中加入的提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品鲜重,g;T:反应时间,20min。

超氧阴离子(OFR)含量检测试剂盒注意事项:

1、OD值大于1.0,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、样品制备好之后,立刻进行测定,请勿将样品进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。

3、试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。

原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司

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