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过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒

点击次数:8138 日期:2021/6/21 10:26:11

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒
规格:50T/48S 
注意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 0.33mL×2 瓶,4℃保存;用时每瓶加入5mL 试剂一;用不完的试剂4℃保存一周; 
试剂三:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存。
产品说明:
POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物, 在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒操作步骤:
一、粗酶液提取:
1、 细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入
1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、 血清(浆)样品:直接检测。二、测定步骤:
1、分光光度计预热30min 以上,调节波长至470nm,蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)放置10min。
3、样本测定表
试剂名称(µL)测定管
样本15
蒸馏水270
试剂一520
试剂二130
试剂三135
在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录470nm下30s 时的吸光值
A1和1min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。
注意:
a.若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液,在 37℃(哺乳动物) 或 25℃(其它物种)放置10min 以上,测定时加入15µL 样本和1055µL 混合液测定。
b.如果ΔA 小于0.005,可将反应时间延长到5min。如果ΔA 大于0.5,可将样本用提取液稀释后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。
三、POD 活性计算:
1、 血清(浆)POD 活性
单位定义:每mL血清(浆)在每mL 反应体系中每分钟A470 变化0.01 为一个酶活力单位。计算公式:POD(U/mL)=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =7133×ΔA
2、 组织、细菌或细胞 POD 活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞数量计算
单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟 A470 变化0.01为一个酶活力单位。
POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V 样总)÷0.01÷T=14.27×ΔA
V反总:反应体系总体积,1.07mL;V样:加入样本体积,0.015mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500万。

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