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土壤酸性磷酸酶活性检测试剂盒
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号: H0486
规格: 50T/48S
产品内容:
试剂一:液体 21mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前加 50mL 蒸馏水充分溶解。试剂三:液体 11mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1 支,4℃避光保存。临用前加 1152µL 无水乙醇(自备),48 µL 蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)
标准品:液体 1mL×1 瓶,0.5 µmol/mL 苯酚标准液,4℃保存。
产品说明:
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 显著影响,根据最适pH 范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。酸性环境中, S- ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP 活性。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
土壤酸性磷酸酶活性检测试剂盒操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取风干混匀土壤约 0.1g,加入0.05mL 甲苯(自备),轻摇15min;加0.4 mL 试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000rpm,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤:
1.可见分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。
2.空白管:取1mL 玻璃比色皿,加入 50 µL 试剂一,200 µL 试剂三,20 µL 试剂四,充分混匀, 显色后再加蒸馏水 730 µL,混匀后室温静置 30 min,于660 nm 测定吸光度,记为A 空白管。
3.标准管:取1mL 玻璃比色皿,加入 50 µL 标准液,200 µL 试剂三,20 µL 试剂四,充分混匀, 显色后再加蒸馏水 730 µL,混匀后室温静置 30 min,于660 nm 测定吸光度,记为A 标准管。
4.测定管:取1mL 玻璃比色皿,加入50 µL 上清液,200µL 试剂三,20 µL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水730 µL,混匀后室温静置 30 min,于660 nm 测定吸光度,记为A 测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
三、S-ACP 活性计算:
活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。
S-ACP(nmol/d/g)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总×1000÷W÷T
=725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液:0.5 µ mol/mL; V 总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,24 h=1 d;1000:单位换算系数,1µmol=1000nmol。
注:线性范围为 0.03125µmol/mL-1.5µmol/mL。
原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司
标签:土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒 土壤酸性磷酸酶检测试剂盒 S-ACP活性检测试剂盒
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