捷世康生物是一家专注于生命科学和生物技术领域的“新星”企业,产品及代理品牌产品范围涵盖了分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学等生命科学相关领域及相关实验室消耗品
货号: H0090
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体100μL×3瓶,4℃保存。
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的 H2O2 清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
一、粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备
细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(功率20%或 200w,超声3秒,间隔10秒。重复30次);8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
二、CAT 测定操作
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至240nm处,蒸馏水调零。
2、 CAT检测工作液的配置:用时在每瓶试剂二(100μL)中加入20ml试剂一,充分混匀,作为工作液;用不完的试剂4℃保存一周。
3、 测定前将CAT检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴10min。
4、 取 1mL CAT 检测工作液于1mL石英比色皿中,再加入35μL样本,混匀 5s;室温下立即测定 240nm
下的初始吸光值 A1和1min后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2
1、 血清(浆)CAT活力的计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mL)=﹝ΔA×V 反总÷(ε×d)×109﹞÷V 样÷T=678×ΔA
2、 组织、细菌或细胞中CAT活力计算:
a. 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot)=﹝ΔA×V 反总÷(ε×d)×109﹞÷(V样×Cpr)÷T=678×ΔA÷Cpr
b. 按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g鲜重)=﹝ΔA×V 反总÷(ε×d)×109﹞÷(W×V 样÷V 样总)÷T=678×ΔA÷W
3、 按细菌或细胞中CAT活力计算:
单位的定义:每 1万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/104cell)=﹝ΔA×V反总÷(ε×d)×109﹞÷(500×V 样÷V样总)÷T=1.356×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1.035×10-3L;ε: H2O2 摩尔吸光系数,4.36×104L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.035ml;V样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,1min。W,样本质量,g;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/ml;500:细胞或细菌总数,500万
原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司
标签:过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 过氧化氢酶检测试剂盒 CAT活性检测试剂盒 CAT检测试剂盒
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