抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性检测试剂盒

货号：H0082 

规格：50T/48S

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品内容：

试剂一：液体90mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入5mL 双蒸水充分溶解；

试剂三：液体5mL×1 瓶，4℃保存。

产品说明：

APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化 H₂O₂ 氧化 AsA，是植物 AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到 AsA  的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX 与 AsA 具有一定的负相关性。

APX 催化H₂O₂ 氧化AsA，通过测定AsA 的氧化速率，可计算得APX 活力。

试验中所需的仪器和试剂：

低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取 ：

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

二、测定操作表：

1. 分光光度计预热30 min 以上，调节波长到290nm，用蒸馏水调零。

2. 试剂一在25℃中预热30min以上。

3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL 蒸馏水、700μL预热的试剂一、100μL试剂二和

100μL试剂三，迅速混匀后在290nm 测定10 s 和130 s 光吸收A1 和A2，△A 空白管=A1-A2。

4. 测定管：依次在 1mL 石英比色皿中加入100μL 上清液、700μL 预热的试剂一、100μL 试剂二和

100μL 试剂三，迅速混匀后在 290nm 测定 10 s 和 130 s 光吸收 A3 和 A4，△A 测定管=A3-A4。三、APX 活力计算：

(1) 按样本蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为1U。

APX(U/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d）×V 反总×10⁶÷(Cpr×V 样)÷T

=1.79×(△A 测定管-△A 空白管) ÷ Cpr

ε：AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×10³L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V 反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL）， 100μL=0.1 ml；T：催化反应时间（min），2min。

（2）按样本质量计算

单位的定义：每 g 组织每分钟氧化 1μmol AsA 为 1U。

APX(U/g ) = (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d）×V 反总×10⁶÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=1.79×(△A 测定管-△A 空白管) ÷W

ε：AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V 反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V 样：加入反应体系中上清液体积

（mL），100μL=0.1 mL；V 样总：加入试剂一体积，1mL；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），

2min。

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司

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